Thứ năm, 25/06/2015 00:14
Xây dựng đối chứng chuẩn cho kỹ thuật MS-PCR xác định methyl hóa promoter BRCA1 ở mẫu bệnh phẩm ung thư vú
Vũ Duy Diệu, Đoàn Thị Hồng Vân, Tạ Bích Thuận, Võ Thị Thương Lan*
*Tác giả chính: email: vothithuonglan@hus.edu.vn
Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội
Ngày nhận bài: 03/02/2015; ngày chuyển phản biện: 09/02/3015; ngày nhận phản biện: 04/03/2015; ngày chấp nhận đăng: 10/03/2015
Tóm tắt:
Trong nghiên cứu này, các tác giả sử dụng plasmid tái tổ hợp và ADN của dòng tế bào ung thư PC3 (có 1 bản sao của gen BRCA1 bị methyl hóa) để xây dựng đối chứng chuẩn cho kỹ thuật MS-PCR (methylation-specific polymerase chain reaction), kỹ thuật phát hiện sự methyl hóa cytosine. Kết quả cho thấy, độ nhạy phát hiện cao nhất với plasmid dạng thẳng đạt 6 bản copy BRCA1 bị methyl hóa/10000 bản copy BRCA1 không bị methyl hóa, trong khi độ nhạy phát hiện với plasmid dạng vòng và siêu xoắn đạt 126 copy BRCA1 bị methyl hóa/10000 bản copy BRCA1 không bị methyl hóa. Khi sử dụng ADN tách chiết từ dòng tế bào PC3, kỹ thuật MS-PCR cho phép phát hiện 2 bản sao BRCA1 bị methyl hóa. Kết quả thu được hoàn toàn phù hợp với các nghiên cứu trước đó khi sử dụng plasmid ở dạng thẳng đảm bảo độ nhạy cao hơn so với plasmid ở dạng siêu xoắn. Plasmid tái tổ hợp dạng thẳng được chọn làm đối chứng chuẩn trong bộ sinh phẩm phát hiện BRCA1 bị methyl hóa ở các mẫu bệnh phẩm ung thư vú.
Từ khóa:
gen BRCA1 (breast cancer 1, early onset), khuếch đại đặc hiệu methyl MS-PCR (methylation-specific polymerase chain reaction), methyl hóa ADN, sự biến đổi di truyền ngoại gen, ung thư vú.
Establtshing the standard control of MS-PCR (methylation - specific PCR) reaction to determine methylation of brca1 gene promoter in breast cancer samples
Received: 3 February 2015; accepted: 10 March 2015
Abstract:
In this study, genomic DNA from the PC3 cancer cell line and the recombinant plasmid containing the methylated BRCA1 sequence have been isolated from transformants. The linear plasmid DNA and bisulfite treated PC3 DNA which carry the methylated BRCA1 sequences have been used as templates for PCR with the MS- PCR primers. The results have shown that the MS-PCR has been capable of detecting 6 copies of the methylated BRCA1 sequence per 10000 copies of the non-methylated BRCA1 sequence from linear plasmid and 2 copies from PC3 genomic DNA. These results have been absolutely consistent with that of the previous reports, which has indicated that
linear recombinant plasmid and genomic DNA extracted from breast cancer cell lines are suitable for establishing the standard control
of the MS-PCR method. The authors have suggested that the linear plasmid DNA should be used as a positive control in the MS-PCR to determine the methylated BRCA1 sequence in breast cancer samples.
Keywords:
BRCA1 (breast cancer 1, early onset), breast cancer. gene DNA methylation, igenetics, methylation-specific PCR (MS-PCR).
Classification number:
1.6