Xây dựng quy trình khuếch đại đẳng nhiệt Recombinase polymerase amplification (RPA) phát hiện Leptospira spp. gây bệnh
Hồ Hữu Thọ 1,2* , Lê Thị Thuý 1, Nguyễn Đình Ứng 1, Hồ Anh Sơn 1, Hoàng Văn Lương 1, Nguyễn Văn Chuyên 3, Nguyễn Văn Ba 2, Nguyễn Trọng Chính 2
1 Viện Nghiên cứu Y dược học Quân sự, Học viện Quân y
2 Bệnh viện Quân y 103, Học viện Quân y
3 Khoa Vệ sinh quân đội, Học viện Quân y
Ngày nhận bài: 19/07/2019; ngày chuyển phản biện: 22/07/2019; ngày nhận phản biện: 19/08/2019; ngày chấp nhận đăng: 28/08/2019
Tóm tắt:
Leptospirosis, hay vàng da do xoắn khuẩn là một trong những bệnh truyền nhiễm phổ biến nhất trên thế giới với tác nhân gây bệnh là các loài Leptospira spp. gây bệnh thuộc chi Letospira. Ở Việt Nam, leptospirosis được xem là bệnh đặc hữu và có nguy cơ bùng phát thành dịch cao nếu không được chẩn đoán và điều trị kịp thời. Ứng dụng kỹ thuật PCR là một hướng đi triển vọng trong phát hiện Leptospira spp. giai đoạn sớm của bệnh. Tuy nhiên, kỹ thuật này quá phức tạp và đòi hỏi khắt khe trong quá trình vận hành máy luân nhiệt, nên đã được thay thế bởi các phương pháp khuếch đại đẳng nhiệt. Trong nghiên cứu này, nhóm tác giả đã xây dựng thành công quy trình khuếch đại đẳng nhiệt Reacombinase polymerase amplification (RPA) phát hiện chính xác một số loài Leptospira spp. gây bệnh chỉ với thời gian 30 phút. Quy trình RPA được xây dựng có ngưỡng phát hiện, độ nhạy và độ đặc hiệu tương đương với bộ kit thương mại hiện có trên thị trường.
Từ khóa:
độ đặc hiệu, độ nhạy, khuếch đại đẳng nhiệt, Leptospira spp., Việt Nam
Development of isothermal Recombinase polymerase amplification (RPA) process for detection of Leptospira spp. causing diseases
Huu Tho Ho 1, 2*, Thi Thuy Le 1, Dinh Ung Nguyen1, Anh Son Ho1, Van Luong Hoang1, Van Chuyen Nguyen3, Van Ba Nguyen2, Trong Chinh Nguyen2
1Military Medical Research Institute, Military Academy
2Military Medical Hospital 103, Military Academy
3Department of Military Hygiene, Military Academy
Received: 19 July 2019; accepted: 28 August 2019
Abstract:
Leptospirosis is one of common infectious diseases in the world with the pathogen as Leptospira spp. belonging to Leptospira. In Vietnam, leptospirosis is considered a endemic disease, and there is a high risk of outbreaks if not diagnosed and treated promptly. Application of realtime PCR technique is promoting technique in the detection of Leptospira spp. at the early stages of the disease. However, this technique is too complex and demanding in the operation of the thermal cycler, so it is increasingly replaced by isothermal amplification methods. In this study, the team successfully developed an isothermal amplification process using Reacombinase polymerase amplification (RPA) to accurately detect Leptospira spp. causing the disease with the detection time of only 30 minutes. The RPA process developed by the team not only has a limit of detection (LOD) equivalent to the commercially available kit (100 copies/reaction) but also achieves similar sensitivity and specificity (100%).
Keywords:
isothermal amplification, Leptospira spp., sensitivity, specificity, Vietnam
Classification number:
3.5